Separar compuestos polares en HPLC puede ser todo un desafío. Muchos analistas se enfrentan a problemas como baja retención, picos solapados o mala reproducibilidad cuando usan fases convencionales.
En este artículo, te explicamos por qué ocurre esto y te damos estrategias prácticas para mejorar la separación de compuestos polares en tus análisis cromatográficos.
¿Por qué es difícil separar compuestos polares?
- Los compuestos polares tienden a eluir demasiado rápido en columnas C18 convencionales.
- Existe una falta de interacción hidrofóbica suficiente con la fase estacionaria tradicional.
- Pueden ocurrir interacciones residuales con los grupos silanol de la sílice, provocando colas en los picos.
Todo esto lleva a baja retención y poca resolución.
Soluciones prácticas para mejorar la separación de compuestos polares
- Utilizar columnas HILIC (Cromatografía de Interacción Hidrofílica)
- Las columnas HILIC son ideales para compuestos polares.
- Funcionan usando una fase estacionaria polar y una fase móvil rica en acetonitrilo.
- Mejoran enormemente la retención de moléculas polares como aminoácidos, azúcares o nucleótidos.
Ejemplo de fases HILIC:
- Silica modificada.
- Amidas.
- Fases diol.
- Modificar la fase móvil en columnas C18
- Añadir una pequeña cantidad de fase acuosa inicial (por ejemplo, 95% agua) puede mejorar la retención de compuestos polares en C18.
- Ajustar el pH puede favorecer la forma neutra de la molécula, aumentando su retención.
Consejo: Para ácidos, usar pH bajo; para bases, pH alto.
- Utilizar fases C18 especiales para compuestos polares
- Existen columnas C18 diseñadas para retener mejor moléculas polares, como C18 con grupos polares integrados o de finalización polar (Polar Endcapped).
- Uso de columnas CN (Cianopropilo)
- Las columnas CN tienen una fase estacionaria moderadamente polar.
- Permiten una mejor retención de analitos polares ligeros sin perder la facilidad de manejo de una columna de fase reversa.
Tabla rápida: opciones para compuestos polares
| Problema | Solución recomendada |
| Baja retención | Uso de columna HILIC |
| Mala forma de pico | Ajuste de pH en fase móvil |
| Solapamiento de picos | Columnas C18 polares o CN |
| Necesidad de alta reproducibilidad | Sistemas de agua ultrapura en fase móvil |
Casos típicos donde se recomienda HILIC
- Análisis de carbohidratos.
- Metabolómica (pequeñas moléculas polares).
- Análisis de péptidos pequeños.
- Separación de medicamentos altamente hidrosolubles.
Conclusión
Separar compuestos polares de forma eficiente no solo depende del tipo de columna: la fase móvil, el pH y la estrategia de elución son también factores claves.
En Advanced Chromatography, te ofrecemos columnas HILIC, columnas C18 especiales y asesoramiento técnico para optimizar tus separaciones polares.
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